Kitapo fitiliana asidra nokleika vaovao (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluakorascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Vaovao Coronavirus(SARS-Cov-2) Kit fitiliana asidra nokleika (Fluorescent RT-PCR Probe fomba)
【Packaging specifications 】25 Fitsapana/Kota
【Intended usTAONA】
Ity kitapo ity dia ampiasaina amin'ny fitiliana qualitative ny asidra nokleika avy amin'ny coronavirus vaovao amin'ny swab nasopharyngeal, swab oropharyngeal (tenda), swab nasal aloha, swab mid-turbinate, fanasana orona ary aspirate nasal avy amin'ny olona ahiahiana ho COVID19 avy amin'ny mpitsabo azy ireo. Ny fitadiavana ny fototarazo ORF1ab sy N amin'ny coronavirus vaovao dia azo ampiasaina amin'ny fitiliana fanampiny sy ny fanaraha-maso ny areti-mifindra amin'ny otrikaretina coronavirus vaovao.
【Principles of the procedure 】
Ity kitapo ity dia natao ho an'ny fizahana TaqMan manokana sy primer manokana natao ho an'ny filaharan'ny fototarazo coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab sy N. Ny vahaolana fanehoan-kevitry ny PCR dia misy andiany 3 amin'ny primer manokana sy ny probe fluorescent ho an'ny fitiliana manokana ny tanjona, ary ny andiany fanampiny amin'ny primer manokana sy ny probe fluorescent dia ampiasaina ho fanaraha-maso manara-penitra anatiny amin'ny kitapo hahitana ny fototarazo endogenous.
Ny fitsipiky ny fitsapana dia ny hoe levonina sy simbain'ny hetsika exonuclease ny enzyme Taq ao amin'ny fihetsiky ny PCR ny probe fluorescent manokana, ka misaraka ny vondrona fluorescent mpanao gazety sy ny vondrona fluorescent vonoina, mba hahafahan'ny rafitra fanaraha-maso fluorescence mahazo fluorescent. famantarana, ary avy eo Amin'ny alalan'ny vokatry ny fanamafisam-peo PCR amplification, ny fluorescence famantarana ny probe mahatratra ny tokonam-baravarana sanda-Ct sanda (Ccycle tokonam-baravarana). Raha tsy misy amplicon kendrena, ny vondrona mpanao gazety an'ny probe dia akaiky ny vondrona famonoana. Amin'izao fotoana izao, ny fifindran'ny angovo fluorescence resonance, ary ny fluorescence an'ny vondrona mpanao gazety dia vonoina amin'ny vondrona famonoana, mba tsy ho hitan'ny fitaovana PCR fluorescent ny famantarana ny fluorescent.
Mba hanaraha-maso ny fampiasana ny reagents mandritra ny fitsapana, ny kitapo dia manana fanaraha-maso tsara sy ratsy: ny fanaraha-maso tsara dia misy ny plasmid recombinant toerana kendrena, ary ny fanaraha-maso ratsy dia ny rano voadio, izay ampiasaina hanaraha-maso ny fandotoana ny tontolo iainana. Amporisihina ny hametraka fanaraha-maso tsara sy fanaraha-maso ratsy miaraka rehefa manao fitiliana.
【Main components 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Components | |
năme | Specification | Quantity | Quantity | |
Fanaraha-maso tsara | 180 μL / vial | 1 | 1 | Plasmid namboarina artifisialy, Rano voadio |
Fanaraha-maso ratsy | 180 μL / vial | 1 | 1 | Rano voadio |
SARS-Cov-2 Mix | 358,5 μL/voankazo | 1 | / | Ireo mpivady voalohany manokana, fitiliana fluorescent manokana, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, rano voadio, sns |
Enzyme Mix | 16,5 μL/voankazo | 1 | / | Taq enzymes, reverse transcriptase, UNG enzymes, sns. |
SARS-Cov-2 Mix(Lyophilised) | 25 fitsapana / vial | / | 1 | Ireo mpivady voalohany manokana, fitiliana fluorescent manokana, dNTPs, enzymes Taq, transcriptase mivadika, rano voadio, sns. |
2x bofy | 375 μL / vial | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, rano voadio, sns. |
Fanamarihana:(1) Ny singa ao amin'ny kitapo batch samihafa dia tsy azo afangaro na ovaina.
(2) Omano ny reagent anao manokana: kitapo fitrandrahana asidra nukleika.
【Storage condîţions SY expiration date 】
For BST-SARS-25:Fitaterana sy fitehirizana amin'ny -20±5 ℃ mandritra ny fotoana maharitra.
For BST-SARS-DR-25:Fitaterana amin'ny mari-pana. Tehirizo ao amin'ny -20±5 ℃ mandritra ny fotoana maharitra.
Halaviro ny tsingerin'ny fatiantoka miverimberina. Ny fe-potoana manan-kery dia napetraka mandritra ny 12 volana.
Jereo ny etikety momba ny daty fanamboarana sy fampiasana.
Aorian'ny fanokafana voalohany, ny reagent dia azo tehirizina ao amin'ny -20 ± 5 ° C mandritra ny 1 volana na mandra-pahatapitry ny vanim-potoanan'ny reagent, na inona na inona daty tonga aloha, mba hisorohana ny fihodinana miverimberina miverimberina, ary ny isan'ny reagent mivaingana. -tsy tokony hihoatra ny in-6 ny tsingerina fandoroana.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Karazana santionany azo ampiharina: Vahaolana asidra nukleika nalaina.
2. Sample fitehirizana sy fitaterana: Store amin'ny-20 ± 5 ℃ mandritra ny 6 volana. Afangaro sy thaw ny santionany tsy mihoatra ny in-6.
【Testing metHoda】
1.Nucleic acid extraction
Mifidiana kitapo fitrandrahana asidra nokleika mety hanesorana ny asidra nokleika viriosy, ary araho ny torolàlana momba ny kitapo mifanaraka amin'izany. Amporisihina ny hampiasa kitapo fitrandrahana asidra nokleika sy fanadiovana novokarin'ny Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. na kitapo fanadiovana asidra nokleika mitovy aminy.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Esory ny fangaro SARS-Cov-2 sy ny Enzyme Mix, levona tanteraka amin'ny mari-pana amin'ny efitra fangaro tsara amin'ny fitaovana Vortex ary avy eo centrifuge vetivety.
(2) 16.5uL Enzyme Mix dia nampiana 358.5uL SARS-Cov-2 Mix ary nafangaro tsara mba hahazoana ny vahaolana mifangaro.
(3) Manomàna fantsona octal PCR 0,2 mL madio ary mariho amin'ny 15uL amin'ny vahaolana fangaro mifangaro etsy ambony isaky ny lavaka.
(4) Ampio 15 μL ny vahaolana asidra nokleary voadio, ny fanaraha-maso tsara sy ny fanaraha-maso ratsy, ary sarony tsara ny satroka fantsona octal.
(5) Afangaro tsara amin'ny alàlan'ny fanodikodinana ambony ambany, ary asio centrifuge haingana mba hampifantohana ny rano ao amin'ny faran'ny fantsona.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Ampio 375ul 2x Buffer amin'ny SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) hanomanana ny fangaro fanehoan-kevitra. Afangaro tsara amin'ny alalan'ny pipetting ary avy eo centrifuge vetivety. (Rehefa voaomana ny fangaro fanehoan-kevitra dia asaina mitahiry ao amin'ny -20 ℃ amin'ny fitahirizana maharitra.)
(2) Manomàna fantsona octal PCR 0,2 mL madio ary asio marika miaraka amin'ny fangaro fanehoan-kevitra 15μL isaky ny lavadrano.
(3) Ampio 15μL ny vahaolana asidra nokleary voadio, ny fanaraha-maso tsara sy ny fanaraha-maso ratsy, ary manarona tsara ny satrony octal fantsona.
(4) Afangaro tsara amin'ny alàlan'ny fanodikodinana ambony ambany, ary centrifuge haingana mba hampifantohana ny ranon-javatra eo amin'ny farany ambany amin'ny fantsona.
3. PCR amplification (Azafady, jereo ny boky torolalana momba ny fiasana.)
3. 1 Apetraho ao anaty efitrano santionany amin'ny fitaovana PCR fluorescent ny PCR 8-tube, ary apetraho ny santionany hotsapaina, ny fanaraha-maso tsara sy ny fanaraha-maso ratsy araka ny filaharan'ny entana.
3.2 fantsona fitiliana fluorescence:
(1) ORF1ab fototarazo dia mifidy ny fantsona fitiliana ny FAM (Mpitatitra: FAM, Quencher: Tsy misy).
(2) N gene no mifidy ny fantsona fitiliana ny VIC (Mpanao tatitra: VIC, Quencher: Tsy misy).
(3) Ny fototarazo mahazatra anatiny dia misafidy ny fantsona fitiliana ny CY5 (Mpanao tatitra: CY5, Quencher: Tsy misy).
(4) Ny Reference Passive dia napetraka amin'ny ROX.
3.3 Fametrahana mari-pamantarana fandaharana PCR:
Dingana | Temperature (℃) | Time | Isan'ny tsingerina | |
1 | Fihetseham-po transcription mivadika | 50 | 15 min | 1 |
2 | Taq enzyme activation | 95 | 2.5 min | 1 |
3 | Taq enzyme activation | 93 | 10 s | 43 |
Fanitarana fanitarana sy fahazoana fluorescence | 55 | 30 s |
Aorian'ny fametrahana, tehirizo ny rakitra ary tanteraho ny programa fanehoan-kevitra.
4.Results analysis
Aorian'ny fiafaran'ny programa dia voatahiry ho azy ny valiny, ary hamakafaka ny curve amplification. Ny curve amplification dia napetraka amin'ny tokonam-baravaran'ny fitaovana.
【Explanation of test results 】
1. Farito ny maha-marina ny andrana: Ny fantsona FAM, VIC fanaraha-maso tsara dia tokony hanana curve fanamafisam-peo mahazatra, ary ny sandan'ny Ct amin'ny ankapobeny dia latsaky ny 34, saingy mety hiovaova noho ny fiovaovan'ny tokonam-baravarana samihafa amin'ny fitaovana samihafa. Ny fanaraha-maso ratsy FAM, fantsona VIC dia tsy tokony hohamafisina Ct. Ekena fa ny fepetra voalaza etsy ambony dia tsy maintsy fenoina miaraka, raha tsy izany dia tsy manan-kery ity fitsapana ity.
2. Vokany fitsarana
Fantsona FAM/VIC | Vokatry ny fitsarana |
Ct<37 | Ny santionany fitsapana dia tsara |
37≤Ct<40 | Ny curve fanamafisam-peo dia miendrika S, ary ny santionany mampiahiahy dia mila averina jerena; raha tsy mifanaraka ny valim-panadinana dia tsaraina ho tsara fa raha tsy izany dia ratsy |
Ct≥40 na tsy misy fanamafisam-peo | Ny fitsapana santionany dia ratsy (na ambanin'ny fetra ambany indrindra amin'ny fitadiavana kitapo) |
Fanamarihana: (1) Raha samy tsara ny fantsona FAM sy ny fantsona VIC dia tapa-kevitra ny ho tsara ny SARS-Cov-2.
(2) Raha tsara ny fantsona FAM na ny fantsona VIC ary ny fantsona hafa dia ratsy, dia tokony haverina ny fitsapana. Raha tsara miaraka amin'izay dia ho tsaraina ho tsara SARS-Cov-2, raha tsy izany dia ho tsaraina ho ratsy SARS-Cov-2.